Myco-Blue Mycoplasma Detector
黴漿菌快速檢試劑組
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ZGVD101-01 / 02 20 / 50 Test
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黴漿菌快速檢試劑組 產品說明
Myco-Blue Mycoplasma Detector是專門針對細胞培養物的黴漿菌快速檢測試劑，其核心為獨特的恆溫放大技術。 Myco-Blue Mycoplasma Detector使用非常簡便，只需吸取1 μl細胞培養上清液加入到反應中，在60°C恆溫1小時。若細胞培養物被黴漿菌污染，黴漿菌DNA的保守序列會被恆溫DNA聚合酶專一性放大，使反應液由紫色變成天藍色，肉眼觀察，即可判定結果。無需PCR儀/qPCR儀，無需電泳，在細胞房內就可以輕鬆完成。
Myco-Blue Mycoplasma Detector可檢測多達28種黴漿菌，包括細胞培養常見的8種黴漿菌。
與常用的PCR法相比，Myco-Blue Mycoplasma Detector對培養上清中的抑制物耐受度更強，因此不會出現弱陽性、假陰性；反應完成後無需開蓋電泳，避免了放大產物溶膠造成的假陽性；檢測結果與目前最靈敏、最準確的定量PCR法具有極高的一致性。
經驗證，Myco-Blue Mycoplasma Detector適用於各種懸浮、貼壁培養細胞，包括CHO，Vero，雜交瘤，Sf9，293等，且具有廣泛的培養基、血清兼容性，因此非常適合於生物製藥企業、疫苗生產企業、單抗生產企業、細胞治療/胚胎實驗室的日常黴漿菌檢測。
超過95%以上的細胞是被8種黴漿菌污染的2。 MycoBlue Mycoplasma Detector可以準確檢出包括這8種在內的28種黴漿菌
Myco-Blue Mycoplasma Detector可檢測多達28種黴漿菌，包括細胞培養常見的8種黴漿菌。
與常用的PCR法相比，Myco-Blue Mycoplasma Detector對培養上清中的抑制物耐受度更強，因此不會出現弱陽性、假陰性；反應完成後無需開蓋電泳，避免了放大產物溶膠造成的假陽性；檢測結果與目前最靈敏、最準確的定量PCR法具有極高的一致性。
經驗證，Myco-Blue Mycoplasma Detector適用於各種懸浮、貼壁培養細胞，包括CHO，Vero，雜交瘤，Sf9，293等，且具有廣泛的培養基、血清兼容性，因此非常適合於生物製藥企業、疫苗生產企業、單抗生產企業、細胞治療/胚胎實驗室的日常黴漿菌檢測。
超過95%以上的細胞是被8種黴漿菌污染的2。 MycoBlue Mycoplasma Detector可以準確檢出包括這8種在內的28種黴漿菌
MycoBlue Mycoplasma Detector 操作流程
MycoBlue VS qPCR VS PCR 檢測
Myco blue 結果和L牌 qPCR 檢測結果一致 比PCR檢測方式準確度更高
在60°C恆溫1小時。若細胞培養物被黴漿菌污染，黴漿菌DNA的保守序列會被恆溫DNA聚合酶專一性放大，使反應液由紫色變成天藍色，肉眼觀察，即可判定結果。無需PCR儀/qPCR儀，無需電泳，在細胞房內就可以輕鬆完成。
在60°C恆溫1小時。若細胞培養物被黴漿菌污染，黴漿菌DNA的保守序列會被恆溫DNA聚合酶專一性放大，使反應液由紫色變成天藍色，肉眼觀察，即可判定結果。無需PCR儀/qPCR儀，無需電泳，在細胞房內就可以輕鬆完成。
常見問題及注意事項
Q:如檢測發現污染要如何處理?
A:黴漿菌污染的補救措施
若發現細胞存在黴漿菌污染，建議直接丟棄，防止污染其它細胞。同時，復甦一支同批次凍存的細胞，並進行檢測。如果發現是黴漿菌陽性，則將該批次細胞全部丟棄。如果細胞很珍貴，可使用Myco-Off 黴漿菌清除試劑 (ZGVD102-01)，對細胞進行挽救。
Q. MycoBlueTM Mycoplasma Detector的靈敏度是多少？如何保證檢測靈敏度？
A: 通常情況下，培養上清中的黴漿菌含量在106-108 cfu/ml之間1 。 MycoBlue Mycoplasma Detector可從1 μl培養上清中準確檢出至少500 cfu的黴漿菌，即靈敏度為≤5 × 105 cfu/ml，可以滿足絕大多數實驗的需要。另外據文獻報導，單個黴漿菌感染細胞後，可在3-5天時間內擴增至106 cfu/ml1。因此，盡量在換培養液或傳代3天後再進行檢測，以使上清液中的黴漿菌含量增多，提高檢測率。
Q. 加入培養上清後，反應液即變色；或者反應結束後，反應液顏色呈現紫色與藍色以外的顏色，是什麼原因？如何解決？
A: 在極少數情況下，培養基成分會對MycoBlue試劑的顏色產生干擾。比如我們發現，Cell Boost 5 (Hyclone)會使MycoBlue試劑呈現粉紅色。此時，取少量培養上清或細胞懸液，500 g 離心5分鐘，收集上清液；再高速離心(>12,000 g) 5分鐘，使上清液中可能存在的黴漿菌沉澱。吸掉大部分上清，保留約50 μl；再加入950 μl無菌水，用分注器混勻後，再次高速離心(>12,000 g)5分鐘，吸掉大部分上清液，保留約50 μl；再加入950 μl無菌水，用分注器混勻後，再次高速離心(>12,000 g) 5分鐘，吸掉大部分上清液，保留約50 μl，取1 μl進行檢測。
Q. 如何準確判斷顏色？檢測結果如何拍照保存？
A: 請保證在一個光線良好的環境中觀察反應液顏色。陰性、陽性對照管的顏色是最好的參照。如果沒有設置對照管，也可以和以前的拍照結果比對。每次拍照時，建議用相同的角度、亮度，並以白紙為背景。
Q. 會出現假陽性嗎？
A: 只要稍加注意，不會出現假陽性。最重要的是反應結束後，不能打開管蓋，否則反應產物會產生氣溶膠，導致後續檢測出現假陽性。另外，加樣時注意更換TIP，並將陽性對照放在最後一管加入，也可以進一步降低假陽性出現的風險。
Q. 我的細胞/培養基適合用MycoBlueTM Mycoplasma Detector進行黴漿菌檢測嗎？
A: MycoBlue Mycoplasma Detector適用於各種懸浮、貼壁培養細胞，並對培養基、血清種類具有廣泛兼容性。目前經驗證的細胞和培養基血清包括下列 (但不限於只有這些)：
懸浮細胞：CHO，NS0，293F，小鼠雜交瘤，Sf9，BHK21等；
貼壁細胞：Vero，MDCK，SP2/0，293T，HepG2，Hela，A549，MB-MDA231，L929，MEF等；
培養基：CD FortiCHO，CDM4，Expi 293 Medium，CD Hybridoma，Grace，DMEM，1640，F12等；
血清：胎牛/小牛血清；馬血清；Gibco KSR血清替代物等。
Q:如檢測發現污染要如何處理?
A:黴漿菌污染的補救措施
若發現細胞存在黴漿菌污染，建議直接丟棄，防止污染其它細胞。同時，復甦一支同批次凍存的細胞，並進行檢測。如果發現是黴漿菌陽性，則將該批次細胞全部丟棄。如果細胞很珍貴，可使用Myco-Off 黴漿菌清除試劑 (ZGVD102-01)，對細胞進行挽救。
Q. MycoBlueTM Mycoplasma Detector的靈敏度是多少？如何保證檢測靈敏度？
A: 通常情況下，培養上清中的黴漿菌含量在106-108 cfu/ml之間1 。 MycoBlue Mycoplasma Detector可從1 μl培養上清中準確檢出至少500 cfu的黴漿菌，即靈敏度為≤5 × 105 cfu/ml，可以滿足絕大多數實驗的需要。另外據文獻報導，單個黴漿菌感染細胞後，可在3-5天時間內擴增至106 cfu/ml1。因此，盡量在換培養液或傳代3天後再進行檢測，以使上清液中的黴漿菌含量增多，提高檢測率。
Q. 加入培養上清後，反應液即變色；或者反應結束後，反應液顏色呈現紫色與藍色以外的顏色，是什麼原因？如何解決？
A: 在極少數情況下，培養基成分會對MycoBlue試劑的顏色產生干擾。比如我們發現，Cell Boost 5 (Hyclone)會使MycoBlue試劑呈現粉紅色。此時，取少量培養上清或細胞懸液，500 g 離心5分鐘，收集上清液；再高速離心(>12,000 g) 5分鐘，使上清液中可能存在的黴漿菌沉澱。吸掉大部分上清，保留約50 μl；再加入950 μl無菌水，用分注器混勻後，再次高速離心(>12,000 g)5分鐘，吸掉大部分上清液，保留約50 μl；再加入950 μl無菌水，用分注器混勻後，再次高速離心(>12,000 g) 5分鐘，吸掉大部分上清液，保留約50 μl，取1 μl進行檢測。
Q. 如何準確判斷顏色？檢測結果如何拍照保存？
A: 請保證在一個光線良好的環境中觀察反應液顏色。陰性、陽性對照管的顏色是最好的參照。如果沒有設置對照管，也可以和以前的拍照結果比對。每次拍照時，建議用相同的角度、亮度，並以白紙為背景。
Q. 會出現假陽性嗎？
A: 只要稍加注意，不會出現假陽性。最重要的是反應結束後，不能打開管蓋，否則反應產物會產生氣溶膠，導致後續檢測出現假陽性。另外，加樣時注意更換TIP，並將陽性對照放在最後一管加入，也可以進一步降低假陽性出現的風險。
Q. 我的細胞/培養基適合用MycoBlueTM Mycoplasma Detector進行黴漿菌檢測嗎？
A: MycoBlue Mycoplasma Detector適用於各種懸浮、貼壁培養細胞，並對培養基、血清種類具有廣泛兼容性。目前經驗證的細胞和培養基血清包括下列 (但不限於只有這些)：
懸浮細胞：CHO，NS0，293F，小鼠雜交瘤，Sf9，BHK21等；
貼壁細胞：Vero，MDCK，SP2/0，293T，HepG2，Hela，A549，MB-MDA231，L929，MEF等；
培養基：CD FortiCHO，CDM4，Expi 293 Medium，CD Hybridoma，Grace，DMEM，1640，F12等；
血清：胎牛/小牛血清；馬血清；Gibco KSR血清替代物等。
參考文獻
1. Drexler et al., Mycoplasma contamination of cell cultures: Incidence, sources, effects, detection, elimination, prevention.
Cytotechnology 2002: 39, 75-90.
2. McGarrity et al., Mycoplasmas, molecular biology and pathogenesis. Washington DC: American Society for Microbiology 1992:445-454.
1. Drexler et al., Mycoplasma contamination of cell cultures: Incidence, sources, effects, detection, elimination, prevention.
Cytotechnology 2002: 39, 75-90.
2. McGarrity et al., Mycoplasmas, molecular biology and pathogenesis. Washington DC: American Society for Microbiology 1992:445-454.
黴漿菌污染的來源、防控及清除
黴漿菌污染的來源：
工作環境、操作者本身 (某些黴漿菌在人體內是正常菌群，如口腔黴漿菌M. orale)、培養基 (特別是血清)、被污染細胞造成的交叉污染、實驗器材、製備細胞的原始組織或器官等。黴漿菌污染細胞後，培養液可不發生混濁，因此易被忽視。黴漿菌污染可導致各種問題的產生，包括以下幾個方面：細胞生長速率的改變；誘導細胞形態改變；染色體畸變；細胞代謝改變；細胞復蘇後存活率降低；轉染效率降低；基因表達量異常等。
黴漿菌的防污染措施：
1. 嚴格控制細胞培養環境，培養箱、振盪器定期消毒 (酒精、紫外光殺菌)；保證水源 (水浴鍋、培養箱水盤)清潔；
2. 保證嚴格的無菌操作，儘量減少說話，並帶口罩 (防止口腔黴漿菌污染)；
3. 採購高品質、來源可靠的血清；
4. 外來細胞必須首先經檢測無黴漿菌污染，才可以進入實驗室；
5. 對培養細胞定期進行黴漿菌檢測非常重要。一般來說每1-2周就應該進行一次黴漿菌檢測。將定期檢測常規化，並堅持下去，是細胞培養實驗室應對黴漿菌感染的關鍵。
黴漿菌污染的來源：
工作環境、操作者本身 (某些黴漿菌在人體內是正常菌群，如口腔黴漿菌M. orale)、培養基 (特別是血清)、被污染細胞造成的交叉污染、實驗器材、製備細胞的原始組織或器官等。黴漿菌污染細胞後，培養液可不發生混濁，因此易被忽視。黴漿菌污染可導致各種問題的產生，包括以下幾個方面：細胞生長速率的改變；誘導細胞形態改變；染色體畸變；細胞代謝改變；細胞復蘇後存活率降低；轉染效率降低；基因表達量異常等。
黴漿菌的防污染措施：
1. 嚴格控制細胞培養環境，培養箱、振盪器定期消毒 (酒精、紫外光殺菌)；保證水源 (水浴鍋、培養箱水盤)清潔；
2. 保證嚴格的無菌操作，儘量減少說話，並帶口罩 (防止口腔黴漿菌污染)；
3. 採購高品質、來源可靠的血清；
4. 外來細胞必須首先經檢測無黴漿菌污染，才可以進入實驗室；
5. 對培養細胞定期進行黴漿菌檢測非常重要。一般來說每1-2周就應該進行一次黴漿菌檢測。將定期檢測常規化，並堅持下去，是細胞培養實驗室應對黴漿菌感染的關鍵。