RIPA裂解液
RIPA Lysis Buffer
產品編號
Western及IP細胞裂解液 編號: GMWIP01 
RIPA裂解液(強)  編號: GMRIP01 
RIPA裂解液(中)  編號: GMRIP02
RIPA裂解液(弱)  編號: GMRIP03

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)
​是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用於常規的Western、IP等。 RIPA裂解液的配方有很多種，根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。RIPA裂解液(弱)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.25% sodium deoxycholate以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白降解。 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由於含有較高濃度的介面活性劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

對於培養細胞樣品：
1.溶解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2.對於貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液。用自動吸管來回吸吐數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒後，細胞就會被裂解。
  對於懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100-200微升裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解後應沒有明顯的細胞沉澱。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然後再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由於裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。
3.充分裂解後，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行後續的PAGE、Western、免疫沉澱和免疫共沉澱等操作。
 
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。

對於組織樣品：
1.把組織剪切成細小的碎片。
2.溶解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
3.按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)
4.用組織研磨器打勻，直至充分裂解。
5.充分裂解後，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行後續的PAGE、Western、免疫沉澱和免疫共沉澱等操作。
6.如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切後直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然後同樣離心取上清，用於後續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用組織研磨器打勻，缺點是不如使用組織研磨器那樣裂解充分。
註：裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的複合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用於後續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超音波處理打碎打散該透明膠狀物，隨後離心取上清用於後續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因數，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超音波處理，就可以檢測到這些轉錄因子。