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ZFusion One Step Cloning Kit
單步驟快速載體構築試劑盒(無縫接合試劑盒)
• 簡單、快速、高效，適用於任何載體
• PCR產物無需限制酶切；不依賴於連接酶(Sub-cloning is unnecessary : Clone any insert, into any location, within any vector)
• 有效cloning 50 bp-10 kbp DNA片段
• PCR產物可不進行純化直接cloning
• 可用於DNA高效定點突變
應用 Applications
•PCR cloning
•Multiple fragment cloning
•Gene synthesis
•Gene design
•Domain swapping
•Domain modification
•Mutagenesis
產品描述：
ZFusion技術是一種簡單、快速並且高效率DNA directed cloning技術，可將插入片段PCR產物directed cloning至任意載體的任意位點。將載體進行線性化，並在插入片段PCR引子5’端引入線性化載體的末端序列，使得PCR產物5’和3’最末端分別帶有和線性化載體兩末端一致的序列（15 bp～20 bp）。這種兩端帶有載體末端序列的PCR產物和線性化載體按一定比例混合後，在Exnase的催化下，僅需反應 30 min即可進行轉化，完成定向clone，成功率可達95%以上。ZFusion是新一代的重組克隆試劑盒，包含增強的重組酶Exnase II。和上一代產品相比，Exnase II中添加了獨特的重組增強效果。一方面，這種增強效果可以有效提高重組Cloning效率，即便使用一般competent cell（10^7 cfu/μg）也可實現高效克隆（100 cfu/ng Vector）。另一方面，Exnase II還相容一般酶切、PCR反應。載體的酶切或PCR產物和插入片段PCR產物可以不進行DNA純化，直接用於重組克隆，大大的簡化了實驗步驟。
單步驟快速載體構築試劑盒(無縫接合試劑盒)
• 簡單、快速、高效，適用於任何載體
• PCR產物無需限制酶切；不依賴於連接酶(Sub-cloning is unnecessary : Clone any insert, into any location, within any vector)
• 有效cloning 50 bp-10 kbp DNA片段
• PCR產物可不進行純化直接cloning
• 可用於DNA高效定點突變
應用 Applications
•PCR cloning
•Multiple fragment cloning
•Gene synthesis
•Gene design
•Domain swapping
•Domain modification
•Mutagenesis
產品描述：
ZFusion技術是一種簡單、快速並且高效率DNA directed cloning技術，可將插入片段PCR產物directed cloning至任意載體的任意位點。將載體進行線性化，並在插入片段PCR引子5’端引入線性化載體的末端序列，使得PCR產物5’和3’最末端分別帶有和線性化載體兩末端一致的序列（15 bp～20 bp）。這種兩端帶有載體末端序列的PCR產物和線性化載體按一定比例混合後，在Exnase的催化下，僅需反應 30 min即可進行轉化，完成定向clone，成功率可達95%以上。ZFusion是新一代的重組克隆試劑盒，包含增強的重組酶Exnase II。和上一代產品相比，Exnase II中添加了獨特的重組增強效果。一方面，這種增強效果可以有效提高重組Cloning效率，即便使用一般competent cell（10^7 cfu/μg）也可實現高效克隆（100 cfu/ng Vector）。另一方面，Exnase II還相容一般酶切、PCR反應。載體的酶切或PCR產物和插入片段PCR產物可以不進行DNA純化，直接用於重組克隆，大大的簡化了實驗步驟。
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使用ZFusion進行基因克隆實驗流程。用於重組反應的克隆載體必須為線性化載體。該線性化載體可通過內切酶酶切環狀載體獲得，也可由反向PCR擴增環狀載體獲得（上左）。 插入片段由PCR放大製備。所用放大引子在設計時需在其5’端添加線性化克隆載體末端序列（圖中以紅色和藍色標記）。 使用該引子對放大插入片段，放大產物 5’ 和3’ 最末端的序列分別和線性化克隆載體兩末端序列完全一樣（上右）。 以線性化克隆載體和插入片段放大產物進行重組反應，37℃反應30 min即可完成重組反應，實現兩線狀DNA的體外環化（中）。重組產物直接進行transformation，平板上會形成數百個單克隆供後期陽性篩選（下）。 |
從λDNA中擴增0.5 kb、1 kb、2 kb片段，使用ZFusion MultiS One Step Cloning Kit將其順序重組至pUC 19 EcoRI和HindIII位點之間。重組反應transformation後平板上形成了數百個克隆，而無插入片段的陰性對照反應轉化後只有少數clone形成。
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菌落PCR鑒定重組質體。重組反應transformation後平板上形成了數百個clone中挑取14個進行菌落PCR鑒定。M：Marker III；1-14, 14個clone。如果菌落為自連載體transformation形成，則PCR band 應為150 bp左右；如果片段成功插入載體，則PCR band應為3.5 kb左右。所鑒定clone有13個為陽性。
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ZFusion Multis
One Step Cloning Kit
單步驟快速多片段載體構築試劑盒 (多片段無縫接合試劑盒)
• 適用於向幾乎任何載體在任何位點進行多片段組裝clone
• 無需考慮插入片段自身攜帶的酶切位點
• 可一次實現多至五個插入片段的順序組裝
• 線性化clone載體和PCR產物可不進行純化直接clone
產品描述：
ZFusion技術是一種簡單、快速並且高效的DNA定向clone技術，可將插入片段PCR產物定向clone至任意載體的任意位點。將載體進行線性化，並在插入片段PCR引子5’端引入線性化載體的末端序列，使得PCR產物5’和3’最末端分別帶有和線性化載體兩末端一致的序列（15 bp～20 bp）。這種兩端帶有載體末端序列的PCR產物和線性化載體按一定比例混合後，在Exnase的催化下，只需反應30 min即可進行transformation，完成定向clone，成功率可達95%以上。
ZFusion Multis針對多片段clone開發，試劑盒中包含有專門針對多片段重組優化的buffer和重組酶Exnase Multis。使用本試劑盒，可以將多至五個片段一次性順序組裝。此外，Exnase Multis還相容常規酶切、PCR反應體積。載體酶切或PCR產物以及插入片段PCR產物可以不用純化直接進行反應，極大的簡化了實驗步驟。
單步驟快速多片段載體構築試劑盒 (多片段無縫接合試劑盒)
• 適用於向幾乎任何載體在任何位點進行多片段組裝clone
• 無需考慮插入片段自身攜帶的酶切位點
• 可一次實現多至五個插入片段的順序組裝
• 線性化clone載體和PCR產物可不進行純化直接clone
產品描述：
ZFusion技術是一種簡單、快速並且高效的DNA定向clone技術，可將插入片段PCR產物定向clone至任意載體的任意位點。將載體進行線性化，並在插入片段PCR引子5’端引入線性化載體的末端序列，使得PCR產物5’和3’最末端分別帶有和線性化載體兩末端一致的序列（15 bp～20 bp）。這種兩端帶有載體末端序列的PCR產物和線性化載體按一定比例混合後，在Exnase的催化下，只需反應30 min即可進行transformation，完成定向clone，成功率可達95%以上。
ZFusion Multis針對多片段clone開發，試劑盒中包含有專門針對多片段重組優化的buffer和重組酶Exnase Multis。使用本試劑盒，可以將多至五個片段一次性順序組裝。此外，Exnase Multis還相容常規酶切、PCR反應體積。載體酶切或PCR產物以及插入片段PCR產物可以不用純化直接進行反應，極大的簡化了實驗步驟。
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圖1.使用ZFusion Multis進行多片段組裝clone實驗流程
用於重組反應的clone載體必須首先線性化。線性化可通過酶切或反向PCR獲得（圖，上左）。插入片段由PCR製備。所用放大引子在設計時需在其5'端添加同源序列（圖中以深藍色、深灰色、淺藍色和紅色標記），使得放大產物之間以及放大產物與線性化clone載體之間都具有能夠相互同源重組的一致序列（圖，上右）。在Exnase TM Multis的催化下，線性化載體和插入片段只需在37℃反應30 min即transformation，實現多片段順序組裝並clone至目標載體（圖，中）。 |
圖2.從λDNA中放大0.5 kb、1 kb、2 kb片段，使用ZFusion Multis One
Step Cloning Kit將其順序重組至pUC 19 EcoRI和HindIII位點之間。重組反應transformation後plate上形成了數百個單clone，而無插入片段的陰性對照反應transformation後只有少數單clone形成。
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圖三：菌落PCR確認重組子。重組反應transformation後plate上形成了數百個單clone中挑取14個進行菌落PCR確認。M：Marker III；1-14, 14個單clone。如果菌落為自連載體transformation形成，則PCR band應為150 bp左右；如果片段成功插入載體，則PCR band應為3.5 kb左右。所確認clone有13個為成功。
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