力鈞提供最新基因組編譯工具 - CRISPR-Cas9 System
一次服務完成靶點設計與載體構築
讓您快速進行基因組編譯工作

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CRISPR 構築服務 & CRISPR 快速建構試劑盒

14          Cell line                                     D10A                                 Lentivirus vector                            Chicken                                     Insect                                                
Picture
我們的 CRISPR / Cas9 載體構築服務流程
前往植物CRISPR專用載體

New !! Low off-target Vector  Cas9 1.1

適合細胞基因剔除 CAG Promoter / T7 Promoter 具兩種篩選:螢光+抗生素 EGFP + Puromycin / mCherry + puro
訂購編號:
質體構築服務 pZG22C021.1  
快速構築試劑組 pZG22C021.1K-10(10rxn)  pZG22C021.1K-25 (25rxn) 

CRISPR 載體種類  &  快速載體構築試劑盒
力鈞胚胎專用CRISPR/Cas9載體 : 
is suitable for animal embryo injection ( injection in vitro transcribed RNA of Cas9 and gRNA )
RGN1 胚胎專用(In-vitro transcription) 適合大小鼠 斑馬魚 胚胎顯微注射 T7 Promoter
訂購編號:
質體構築服務 pZG11C01 
快速構築試劑組 pZG11C01K-10(10rxn)  pZG11C01K-25 (25rxn) 
RGN6 胚胎專用(In-vitro transcription) 適合大小鼠 斑馬魚 胚胎顯微注射 T7 Promoter / CAG Promoter 也可應用於細胞
訂購編號:
質體構築服務 pZG21C01 
快速構築試劑組 pZG21C01K-10(10rxn)  pZG21C01K-25 (25rxn) 
胚胎專用(In-vitro transcription) 適合大小鼠 斑馬魚 胚胎顯微注射 T7 Promoter / D10A Cas9 可有效降低off-target effect
訂購編號:
質體構築服務 pZG11D01 
快速構築試劑組 pZG11D01K-10(10rxn)  pZG11D01K-25 (25rxn) 

力鈞細胞專用CRISPR/Cas9載體:
is suitable for cell line transfection (transfection plasmid DNA into cell directly)

CRISPR 常見問題:
1. 各式多合一載體,我們將gRAN Cas9 篩選標記設計在一個載體進行轉染,增加轉染效率
2. 多合一載體不需要計算sgRNA 和Cas9濃度
3. 可選擇抗生素篩選,是螢光篩選或是二合一篩選,選擇篩選Marker主要是篩選轉染效率建議效率需>20%以上再往下進行
4. 螢光及抗生素載體大約在一星期後會漸漸被踢出,螢光及抗生素抗性漸漸失去,請用原本條件進行細胞培養
5. 篩選出的細胞請以單細胞培養,若時間較趕可選擇2-3次方細胞 low cell DNA Kit 粹取DNA,來進行突變篩選
6. 用T7E1酵素進行酶切,切的動的再送定序檢測
7. 基因剔除的細胞大部份為Heterozygous,只有很小的機率為homozygote,若無法挑到homo細胞株,請用Heter細胞株再重新進行
     一次轉染

RGN7 適合細胞基因剔除 CAG Promoter  傳統型 無篩選標記
訂購編號:
質體構築服務 pZG22C01 
快速構築試劑組 pZG22C01K-10(10rxn)  pZG22C01K-25 (25rxn) 
RGN5P/N 適合細胞基因剔除 可選擇 CMV 或 CAG Promoter 篩選標記可選擇 Puromycin 或 Neomycin 抗生素篩選
訂購編號:
質體構築服務 pZG12C01P/N  快速構築試劑組 pZG12C01P/N 1K-10(10rxn)  pZG12C01P/NK-25 (25rxn) 
RGN3 G/R/Y  適合細胞基因剔除 CMV 或 CAG Promoter 篩選標記可選擇 eGFP / mCherry / eYFP 螢光篩選
訂購編號:
質體構築服務 pZG12C02 G/R  快速構築試劑組 pZG12C01G/RK-10(10rxn)  pZG12C01G/RK-25 (25rxn) 
適合細胞基因剔除 CMV Promoter 具兩種篩選:螢光+抗生素 EGFP + Puromycin 
訂購編號:
質體構築服務 pZG12C03 
快速構築試劑組 pZG12C03K-10(10rxn)  pZG12C03K-25 (25rxn) 
RGN8 適合細胞基因剔除 CAG Promoter / T7 Promoter 具兩種篩選:螢光+抗生素 GFP + Puromycin /  mcherry+Puro  
訂購編號:
質體構築服務 pZG22C02 
快速構築試劑組 pZG22C02K-10(10rxn)  pZG22C02K-25 (25rxn) 

D10A Nickase Cas9 細胞專用載體
D10A Nickase Cas9 細胞專用基因剔除 需要一對才可進行基因剔除   CMV Promoter / Neomycine  Or Puromycin
訂購編號:
質體構築服務 pZG12D01N 快速構築試劑組 pZG12D01NK-10(10rxn)  pZG12D01NK-25 (25rxn) 
質體構築服務 pZG12D01P  快速構築試劑組 pZG12D01PK-10(10rxn)  pZG12D01PK-25 (25rxn) 
需一對才可進行10rxn 可合成10條CRISPR 所以只能進行5次基因基因剔除
D10A Nickase Cas9 細胞專用基因剔除 需要一對才可進行基因剔除  CMV Promoter / EGFP / mCherry / EYFP
訂購編號:
質體構築服務 pZG12D02 G/R/Y 
快速構築試劑組 pZG12D02 G/R/Y K-10(10rxn)  pZG12D02 G/R/Y K-25 (25rxn) 
需一對才可進行10rxn 可合成10條CRISPR 所以只能進行5次基因基因剔除

慢病毒專用載體 Lenti virus Vector

For Lentivirus vector : 5' LTR / RRE / Puromycin / eGFP / mCherry / 3' LTR

家禽專用 CRISPR /Cas9  (for Birds/Poultry/Chicken CRISPR /Cas9)

昆蟲專用 CRISPR/Cas9  (for Insect CRISPR /Cas9)

CRISPR/Cas9 D10A nicknase

一般型cas9 與 Cas9 D10A Nicknase 差別在 一般型Cas9載體只有一個sgRNA(可切雙股DNA)Cas9 D10A Nicknase 載體(只能切單股DNA)需要正向及反相各設計一個sgRNA,一次要兩個sgRNA,距離要在50bp以內可造成雙股DNA被切 如下圖圖示，可有效降低off-target effect，但剔除效率會一般型低一些

四合一 CRISPR / Cas9 D10A  Four in one CRISPR/Cas9 D10A
(Cas9 D10A +gRNA+gRNA+Puro/EGFP) 一次可建構2個sgRNA
需一對才可進行10rxn 可合成10條CRISPR 所以只能進行5次基因基因剔除