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力鈞提供最新基因組編譯工具 - CRISPR-Cas9 System
一次服務完成靶點設計與載體構築
讓您快速進行基因組編譯工作

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8次方率勝任細胞

CRISPR 植物專用載體 
                    
&  快速載體構築試劑盒

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植物CRISPR/Cas9 快速構築試劑盒 ( 快速 簡單 便宜 點圖顯示構築流程 )
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力鈞 RGN9植物專用 CRISPR/Cas9 載體

水稻專用載體 :可選擇 Hygr / Bar / GFP
Ubi Promoter / 優化 mpCas9 / rU6 水稻專用U6 Promoter /35s Promoter 
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雙子葉植物專用載體可選擇: Hygr / Bar / Kan / GFP 篩擇標記 (適合用於阿拉伯芥 / 菸草 / 蕃茄)
Ubi Promoter / 優化雙子葉專用 dp Cas9 / atU6 雙子葉專用U6 Promoter / 35s Promoter (NOS-KanR)
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單子葉植物載用載體可選擇: Hygr / Bar / Kan / GFP  適合用於小麥 燕麥 等植物
Ubi Promoter / 優化單子葉專用 mp Cas9 / wU6 單子葉專用U6 Promoter / 35s Promoter (NOS-KanR)
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SaCas9 CRISPR 植物載體

SaCas9是來源於Staphylococcus aureus的Cas9核酸酶,與SpCas9具有相似的DNA切割效率;而SaCas9結構更小,比SpCas9小25%,使得AAV Cas9包裝成為可能。SaCas9主要優點在腺相關病毒(AAV)包裝:AAV的包載大小約為4.5 kb,包裝SpCas9到載體中有一定的困難(Ran et al , 2015)。SaCas9 較小所以更適合進行包裝,在構建SaCas9質體具有更低的免疫原性,因此SaCa9更適用於體內基因編輯的應用。
SaCas9的另一大優勢是專一性強可降低脫靶off-target機率。SaCas9識別更長的PAM序列,識別位點為NGRRT或NGRRN。因為具有更長的序列長度,這個PAM序列在基因中出現的機率更低,大約每32 bp中出現一次,而NGG約每8 bp中出現一次(Kleinstiver et al , 2015)。
使用SaCas9建議gRNA的長度為21-23 bp。

參考文獻:

Ran et al. In vivo genome editing using Staphylococcus aureus Cas9 . Nature. 2015 Apr 9; 520(7546):186-91. Kleinstiver et al. 
Engineered CRISPR-Cas9 nucleases with altered PAM specificities . Nature. 2015 July 23; 523: 481-485.


 Cpf1 CRISPR 植物載體

Cpf1 與 Cas9 相同,也是 sgRNA 。不同於 Cas9 需要兩個 RNA 序列,Cpf1 只需要sgRNA一個序列。Cpf1 同樣有辨認基因用的 PAM,相較於 Cas9 的 G-rich PAM,Cpf1 的 PAM 以 Thymidine為主,這個差異可以讓使用者有較多的選擇。而且,Cpf1 的 PAM 離它切點有一段距離,讓第二階段的調控更簡單。 Cpf1 最大的優點它 DNA 切斷方式會產生Sticky end,讓接下來的基因插入或編輯更加準確(Zetsche et al., 2015)。

參考文獻:
1.Hsu et al., 2014, Cell 157, 1262-1278. “Development and Applications of CRISPR-cas9 for genome engineering”.
2.Zetsche et al., 2015, Cell 163, 759-771. “Cpf1 is a single RNS-guided endonuclease of a class 2 CRISPR-cas system”.
3.Yamano et al., 2016, Cell 165, 949-962. “Crystal structure of Cpf1 in complex with guide RNA and target DNA”.
4.Dong et al., 2016, Nature 532, 522-526. “The crystal structure of Cpf1 in complex with CRISPR RNA”.

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