力鈞提供最新基因組編譯工具 - CRISPR-Cas9 System
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CRISPR 植物專用載體 
                    &  快速載體構築試劑盒
Picture
植物CRISPR/Cas9 快速構築試劑盒 ( 快速 簡單 便宜 點圖顯示構築流程 )

力鈞 RGN9植物專用 CRISPR/Cas9 載體

水稻專用載體 :可選擇 Hygr / Bar / GFP
Ubi Promoter / 優化 mpCas9 / rU6 水稻專用U6 Promoter /35s Promoter 
雙子葉植物專用載體可選擇: Hygr / Bar / Kan / GFP 篩擇標記 (適合用於阿拉伯芥 / 菸草 / 蕃茄)
Ubi Promoter / 優化雙子葉專用 dp Cas9 / atU6 雙子葉專用U6 Promoter / 35s Promoter (NOS-KanR)
單子葉植物載用載體可選擇: Hygr / Bar / Kan / GFP  適合用於小麥 燕麥 等植物
Ubi Promoter / 優化單子葉專用 mp Cas9 / wU6 單子葉專用U6 Promoter / 35s Promoter (NOS-KanR)

SaCas9 CRISPR 植物載體

SaCas9是來源於Staphylococcus aureus的Cas9核酸酶，與SpCas9具有相似的DNA切割效率；而SaCas9結構更小，比SpCas9小25%，使得AAV Cas9包裝成為可能。SaCas9主要優點在腺相關病毒（AAV）包裝：AAV的包載大小約為4.5 kb，包裝SpCas9到載體中有一定的困難(Ran et al , 2015)。SaCas9 較小所以更適合進行包裝，在構建SaCas9質體具有更低的免疫原性，因此SaCa9更適用於體內基因編輯的應用。
SaCas9的另一大優勢是專一性強可降低脫靶off-target機率。SaCas9識別更長的PAM序列，識別位點為NGRRT或NGRRN。因為具有更長的序列長度，這個PAM序列在基因中出現的機率更低，大約每32 bp中出現一次，而NGG約每8 bp中出現一次(Kleinstiver et al , 2015)。
使用SaCas9建議gRNA的長度為21-23 bp。

參考文獻:
Ran et al. In vivo genome editing using Staphylococcus aureus Cas9 . Nature. 2015 Apr 9; 520(7546):186-91. Kleinstiver et al. 
Engineered CRISPR-Cas9 nucleases with altered PAM specificities . Nature. 2015 July 23; 523: 481-485.

 Cpf1 CRISPR 植物載體

Cpf1 與 Cas9 相同，也是 sgRNA 。不同於 Cas9 需要兩個 RNA 序列，Cpf1 只需要sgRNA一個序列。Cpf1 同樣有辨認基因用的 PAM，相較於 Cas9 的 G-rich PAM，Cpf1 的 PAM 以 Thymidine為主，這個差異可以讓使用者有較多的選擇。而且，Cpf1 的 PAM 離它切點有一段距離，讓第二階段的調控更簡單。 Cpf1 最大的優點它 DNA 切斷方式會產生Sticky end，讓接下來的基因插入或編輯更加準確(Zetsche et al., 2015)。

參考文獻：
1.Hsu et al., 2014, Cell 157, 1262-1278. “Development and Applications of CRISPR-cas9 for genome engineering”.
2.Zetsche et al., 2015, Cell 163, 759-771. “Cpf1 is a single RNS-guided endonuclease of a class 2 CRISPR-cas system”.
3.Yamano et al., 2016, Cell 165, 949-962. “Crystal structure of Cpf1 in complex with guide RNA and target DNA”.
4.Dong et al., 2016, Nature 532, 522-526. “The crystal structure of Cpf1 in complex with CRISPR RNA”.