RT-PCR & RT-qPCR & RT反轉錄酵素
基因的表達分析，通常從RNA起始。而RNA的多樣性和不穩定性，往往對下有實驗帶來挑戰。Zgenebio的RNA保存/提取產品使用極其方便，避免了繁瑣的液氮凍存、研磨，而獲得的RNA品質同傳統方法一樣好。基於我們專利的HiScript逆轉錄酶衍生的一系列產品，針對RT-PCR和RT-qPCR分別優化；更有簡便的一管式SuperMix提供。
RT-PCR cDNA合成試劑
定量RT-PCR cDNA合成試劑
反轉錄酶
RT-PCR cDNA合成試劑
定量RT-PCR cDNA合成試劑
反轉錄酶
Reverse Transcriptase 反轉錄酶
● 50℃半衰期超過240分鐘，55℃半衰期可達60分鐘
● 可合成創紀錄的20 kb全長cDNA
● 5分鐘即可合成長達10 kb的cDNA，適合快速反轉錄反應
● 更高的雜質耐受度
● 更高的檢測靈敏度，分子診斷首選反轉錄酶
● 可合成創紀錄的20 kb全長cDNA
● 5分鐘即可合成長達10 kb的cDNA，適合快速反轉錄反應
● 更高的雜質耐受度
● 更高的檢測靈敏度，分子診斷首選反轉錄酶
穩定可靠的逆轉錄酶
M-MLV Reverse Transcriptase
•點突變消除RNase H活性以獲得長的cDNA產物
•對於100 ng以上的RNA範本具有穩定可靠的逆轉錄表現
野生型M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus)具有以下幾種活性：依賴於RNA的DNA聚合酶活性；依賴於DNA的DNA聚合酶活性；RNase H活性。由於RNase H活性能夠催化降解DNA/RNA雜合體中的RNA，因此在cDNA第一條鏈的合成反應中可能會降解範本RNA。M-MLV (H-) Reverse Transcriptase是通過定點突變得到的RNase H活性缺失的M-MLV突變體。與常見的通過刪除(deletion) RNase H結構域方法得到的突變體相比，本產品保留了完整的蛋白結構，因此具有與野生型相同的聚合酶活性，可用於較長的cDNA合成以及全長cDNA文庫的構建等。
M-MLV Reverse Transcriptase
•點突變消除RNase H活性以獲得長的cDNA產物
•對於100 ng以上的RNA範本具有穩定可靠的逆轉錄表現
野生型M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus)具有以下幾種活性：依賴於RNA的DNA聚合酶活性；依賴於DNA的DNA聚合酶活性；RNase H活性。由於RNase H活性能夠催化降解DNA/RNA雜合體中的RNA，因此在cDNA第一條鏈的合成反應中可能會降解範本RNA。M-MLV (H-) Reverse Transcriptase是通過定點突變得到的RNase H活性缺失的M-MLV突變體。與常見的通過刪除(deletion) RNase H結構域方法得到的突變體相比，本產品保留了完整的蛋白結構，因此具有與野生型相同的聚合酶活性，可用於較長的cDNA合成以及全長cDNA文庫的構建等。
Hiscript Reverse Transcriptase
•提高熱穩定性，在50℃擁有最高的cDNA產量
•可耐受高達55℃的反應溫度，適用於具有二級結構的RNA模版
•增強與模版的親和力，可獲得更多全長的cDNA
•高度靈敏，可檢測到低至1 pg的總RNA
•降低了反轉錄過程的錯誤率，提高克隆的保真度
HiScript ® Reverse Transcriptase是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基礎上經過多點突變得到的全新反轉錄酶。HiScript ® Reverse Transcriptase在50℃下活性最高，且可耐受高達55℃的反應溫度，可用於具有二級結構的RNA模版的反轉錄。增強與模版的親和力，可獲得更多全長的cDNA，並可檢測到低至1 pg的總RNA，特別適合少量模版以及低拷貝基因的反轉錄。此外HiScript ® Reverse Transcriptase的錯誤率也比M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase有所降低，提高了克隆的正確度
•提高熱穩定性，在50℃擁有最高的cDNA產量
•可耐受高達55℃的反應溫度，適用於具有二級結構的RNA模版
•增強與模版的親和力，可獲得更多全長的cDNA
•高度靈敏，可檢測到低至1 pg的總RNA
•降低了反轉錄過程的錯誤率，提高克隆的保真度
HiScript ® Reverse Transcriptase是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基礎上經過多點突變得到的全新反轉錄酶。HiScript ® Reverse Transcriptase在50℃下活性最高，且可耐受高達55℃的反應溫度，可用於具有二級結構的RNA模版的反轉錄。增強與模版的親和力，可獲得更多全長的cDNA，並可檢測到低至1 pg的總RNA，特別適合少量模版以及低拷貝基因的反轉錄。此外HiScript ® Reverse Transcriptase的錯誤率也比M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase有所降低，提高了克隆的正確度
穩定可靠的反轉錄酶
M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
點突變消除RNase H活性以獲得長的cDNA產物
對於100 ng以上的RNA模版具有穩定可靠的反轉錄表現
野生型M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus)具有以下幾種活性：依賴於RNA的DNA聚合酶活性；依賴於DNA的DNA聚合酶活性；RNase H活性。由於RNase H活性能夠催化降解DNA/RNA雜合體中的RNA，因此在cDNA第一條鏈的合成反應中可能會降解模版RNA。M-MLV (H-) Reverse Transcriptase是通過定點突變得到的RNase H活性缺失的M-MLV突變體。與常見的通過刪除(deletion) RNase H結構域方法得到的突變體相比，本產品保留了完整的蛋白結構，因此具有與野生型相同的聚合酶活性，可用於較長的cDNA合成以及全長cDNA文庫的構建等。
M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
點突變消除RNase H活性以獲得長的cDNA產物
對於100 ng以上的RNA模版具有穩定可靠的反轉錄表現
野生型M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus)具有以下幾種活性：依賴於RNA的DNA聚合酶活性；依賴於DNA的DNA聚合酶活性；RNase H活性。由於RNase H活性能夠催化降解DNA/RNA雜合體中的RNA，因此在cDNA第一條鏈的合成反應中可能會降解模版RNA。M-MLV (H-) Reverse Transcriptase是通過定點突變得到的RNase H活性缺失的M-MLV突變體。與常見的通過刪除(deletion) RNase H結構域方法得到的突變體相比，本產品保留了完整的蛋白結構，因此具有與野生型相同的聚合酶活性，可用於較長的cDNA合成以及全長cDNA文庫的構建等。
具有超強耐熱性和延伸效率的新一代反轉錄酶
HiScript II Reverse Transcriptase
訂購資訊:ZGVR201-01 / 02 2000U / 10000U
• 50℃半衰期超過240分鐘，55℃半衰期可達60分鐘
• 可合成創紀錄的20 kb全長cDNA
• 5分鐘即可合成長達10 kb的cDNA，適合快速反轉錄反應
• 更高的雜質耐受度
• 更高的檢測靈敏度，分子診斷首選反轉錄酶
產品描述
HiScript Reverse Transcriptase的基礎上，我們通過專利的體外分子進化技術，獲得了一個全新的反轉錄酶突變體-HiScript II Reverse Transcriptase。其攜帶的多個點突變使得其熱穩定性大幅提高，在50℃的半衰期超過240分鐘，並可在55℃長時間反應而保持穩定，保證了具有複雜二級結構模版的反轉錄成功率。同時，高溫下保持的高活性能夠帶來更高的cDNA產量。同時，HiScript II Reverse Transcriptase與模版的親和力 (affinity)以及行進性 (processivity)大幅提高，表現為極強的cDNA持續合成能力。HiScript II Reverse Transcriptase可從小鼠骨骼肌總RNA中反轉錄獲得創紀錄的20.0 kb的cDNA (圖2)，並且5分鐘內的合成長度可達10 kb，非常適合快速反轉錄反應。HiScript® II Reverse Transcriptase對於常見的反轉錄抑制劑具有更好的耐受度。這些抑制劑通常是RNA純化試劑的組分，或者是來源於樣品，在純化過程中會有不同程度的殘留，並在逆轉錄時被引入，如 guanidine、乙醇、木聚糖、EDTA、SDS、CTAB。與野生型的M-MLV (H-)以及其它反轉錄酶相比，HiScript II Reverse Transcriptase對雜質耐受度更高。這對於來源複雜的樣品 (如FFPE組織)，或者富含多糖多酚的植物樣品來說更為重要
• 可合成創紀錄的20 kb全長cDNA
• 5分鐘即可合成長達10 kb的cDNA，適合快速反轉錄反應
• 更高的雜質耐受度
• 更高的檢測靈敏度，分子診斷首選反轉錄酶
產品描述
HiScript Reverse Transcriptase的基礎上，我們通過專利的體外分子進化技術，獲得了一個全新的反轉錄酶突變體-HiScript II Reverse Transcriptase。其攜帶的多個點突變使得其熱穩定性大幅提高，在50℃的半衰期超過240分鐘，並可在55℃長時間反應而保持穩定，保證了具有複雜二級結構模版的反轉錄成功率。同時，高溫下保持的高活性能夠帶來更高的cDNA產量。同時，HiScript II Reverse Transcriptase與模版的親和力 (affinity)以及行進性 (processivity)大幅提高，表現為極強的cDNA持續合成能力。HiScript II Reverse Transcriptase可從小鼠骨骼肌總RNA中反轉錄獲得創紀錄的20.0 kb的cDNA (圖2)，並且5分鐘內的合成長度可達10 kb，非常適合快速反轉錄反應。HiScript® II Reverse Transcriptase對於常見的反轉錄抑制劑具有更好的耐受度。這些抑制劑通常是RNA純化試劑的組分，或者是來源於樣品，在純化過程中會有不同程度的殘留，並在逆轉錄時被引入，如 guanidine、乙醇、木聚糖、EDTA、SDS、CTAB。與野生型的M-MLV (H-)以及其它反轉錄酶相比，HiScript II Reverse Transcriptase對雜質耐受度更高。這對於來源複雜的樣品 (如FFPE組織)，或者富含多糖多酚的植物樣品來說更為重要
圖1. 四種不同的逆轉錄酶分別在50℃和55℃與RT reaction mixture恆溫培育不同時間。剩餘的酶活用標準方法測定。
SS III: Superscript III。
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圖2. 以1 μg HeLa細胞總RNA或小鼠骨骼肌細胞總RNA (for Nebulin)為模版，用HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (R211-01)進行逆轉錄。取1 μl cDNA為模版，用Vazyme LAmp® DNA Polymerase放大。
M. DL15000 Marker.
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圖3. 以1 μg HeLa細胞總RNA為模版，Oligo dT23 VN為引子，分別用HiScript® II Reverse Transcriptase或Superscript® III Reverse Transcriptase (SSIII)在50℃進行逆轉錄，反應時間設置為5、15、30、45分鐘。取1 μl cDNA為模版，用LAmp® DNA Polymerase放大Fibrillin基因10.0 kb或6.1 kb片段。M. DL15000 Marker.
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圖4. 以1 μg HeLa細胞總RNA為模版，分別用HiScript® II Reverse Transcriptase和T品牌逆轉錄酶進行逆轉錄反應，時間設置為5 min。取1 μl cDNA為模版，用LAmp® DNA Polymerase放大FIB 6100 bp和Pole 7117 bp片段。
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圖5. 以1 μg- 1 pg HeLa細胞總RNA為模版，用HiScript® II Q RT SuperMix for qPCR (R222-01)做逆轉錄，取1 μl cDNA為模版，分別用AceQ® qPCR SYBR® Green Master Mix放大B2M基因 (A) 和EGFR基因 (B)。
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One Step RT-PCR Kit
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產品介紹：
One Step RT-PCR Kit專為以RNA為模版(如RNA病毒)的終點法PCR檢測而設計。使用基因專一引物(GSP)，逆轉錄和PCR反應在一管內完成，不需要額外的操作，大大提高了檢測速度，並降低了污染的風險。整合Reverse Transcriptase以及AceTaq DNA Polymerase的優越性能，配合經過優化的Buffer ，One Step RT-PCR Kit的檢測靈敏度可達到1 pg總RNA。試劑組以便捷的Master Mix形式提供。2 × Ace-Hi TM Mix包含優化的Buffer和dNTP； Enzyme Mix包含比例優化的Reverse Transcriptase、RNase inhibitor以及AceTaq DNA Polymerase。 ◎方便快速: 使用單管單步驟RT-PCR系統 ◎獨特配方: 使用MMLV RT 及Taq 酵素混合液 ( Enzyme Mix) 以及特殊reaction buffer , 效果穩定. ◎敏感度高: 附獨家配方Thermo-Enhancer, 使RT可在60℃反應, 可解RNA二級結構,提高RT-PCR產量及長度. order info ZGVP601-50 50RXN |
RT-PCR of 220bp zebraf ish EF-1-α gene by RT-PCR kit.
0.5ng zebrafish total RNA was used for RT-PCR, RT step was performed at 50°C and 60°C respectively. Lane 1 : RT-PCR by supplier A Lane 2 : RT-PCR by supplier B with Enhancer Lane 3 : RT-PCR by One RT-PCR kit with Thermo-Enhancer |
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